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貼壁細(xì)胞接收注意

更新時(shí)間:2025-09-25點(diǎn)擊次數(shù):158

貼壁細(xì)胞接收注意事項(xiàng)


貼壁細(xì)胞經(jīng)過快遞運(yùn)輸顛簸會(huì)出現(xiàn)漂浮脫落等情況: 收到先放培養(yǎng)箱靜置穩(wěn)定。如有脫落需收集處理,處理細(xì)節(jié)請(qǐng)查閱以下信息,原瓶內(nèi)為運(yùn)輸培養(yǎng)液,血清含量只有5%,需及時(shí)更換專用wan全培養(yǎng)基。

收到細(xì)胞后請(qǐng)把細(xì)胞圖片狀態(tài)發(fā)到群, 根據(jù)圖片可以給出接下來的處理建議(傳代或者換液),建議一比二傳代至2個(gè)T25。 

貼壁細(xì)胞傳代步驟: 準(zhǔn)備工作:胰酶和wan全培養(yǎng)基(需要提前37度復(fù)溫)、PBS(常溫)避免細(xì)胞遇冷受刺激

1) 吸出原培養(yǎng)液

2) 加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄

3) 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞。貼壁細(xì)胞傳代步驟: 準(zhǔn)備工作:胰酶和wan全培養(yǎng)基(需要提前37度復(fù)溫)、PBS(常溫)避免細(xì)胞遇冷受刺激

1) 吸出原培養(yǎng)液

2) 加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄

3) 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞。

4) 根據(jù)不同的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱時(shí)及時(shí)關(guān)注消化時(shí)間,消化約2-3min,顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓細(xì)胞間隙變大,顯微鏡下看細(xì)胞呈單個(gè)游離狀態(tài),側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化,可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。(消化時(shí)主要看消化狀態(tài),如果沒有變圓,側(cè)立時(shí)不能滑落時(shí),可以適當(dāng)延長消化時(shí)間,每30s觀察一次細(xì)胞)

5) 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打(不要太用力)使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。

6) 收集細(xì)胞懸液離心,1000rpm/min(約250g) 5分鐘,離心完吸出上清丟棄。

7) 加入新鮮wan全培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按需接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足wan全培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

8) 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳,溫度和水盤。

這個(gè)是貼壁細(xì)胞傳代的方法,特別注意的是第4步消化過程,消化至到細(xì)胞wan全變圓以后側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以出現(xiàn)滑落時(shí)再終止消化。

消化到這樣的成游離狀態(tài),后續(xù)輕輕稍微吹一下即可很好的分散細(xì)胞

后續(xù)處理建議:傳代后2-3天換液一次即可,(如細(xì)胞第二天全部貼壁培養(yǎng)基顏色變黃,可以換液,)無需每天換液(換液太勤可能會(huì)損失細(xì)胞影響細(xì)胞狀態(tài))換液時(shí)候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗

4) 根據(jù)不同的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱時(shí)及時(shí)關(guān)注消化時(shí)間,消化約2-3min,顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓細(xì)胞間隙變大,顯微鏡下看細(xì)胞呈單個(gè)游離狀態(tài),側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化,可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。(消化時(shí)主要看消化狀態(tài),如果沒有變圓,側(cè)立時(shí)不能滑落時(shí),可以適當(dāng)延長消化時(shí)間,每30s觀察一次細(xì)胞)

5) 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打(不要太用力)使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。

6) 收集細(xì)胞懸液離心,1000rpm/min(約250g) 5分鐘,離心完吸出上清丟棄。

7) 加入新鮮wan全培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按需接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足wan全培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

8) 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳,溫度和水盤。

這個(gè)是貼壁細(xì)胞傳代的方法,特別注意的是第4步消化過程,消化至到細(xì)胞wan全變圓以后側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以出現(xiàn)滑落時(shí)再終止消化。

游離細(xì)胞.jpg


消化到這樣的成游離狀態(tài),后續(xù)輕輕稍微吹一下即可很好的分散細(xì)胞

后續(xù)處理建議:傳代后2-3天換液一次即可,(如細(xì)胞第二天全部貼壁培養(yǎng)基顏色變黃,可以換液,)無需每天換液(換液太勤可能會(huì)損失細(xì)胞影響細(xì)胞狀態(tài))換液時(shí)候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗 。


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